越來越多單細胞之間的基因組異質性分析(Cellular Heterogeneity)，為許多研究領域提供有力工具及新的見解，這當中包括癌症的研究、細胞的發育和功能以及免疫學等。

然而，在過去，使用傳統的短讀長(short-read)測序技術受限於亞型(isoform)上鑒定transcripts的能力。短讀長單細胞(scRNA-seq)方法會遺漏80%的大多數transcripts。這是因為短讀長定序需要對全長transcripts進行片段化，導致對transcripts的 3' 或 5' 端進行定序產生了偏差。長奈米孔測序讀長(Long nanopore sequencing reads)解決了這一問題，Oxford Nanopore Technologies提供的測序技術，使全長transcripts的測序能夠更深入地瞭解複雜的生物學，當中包括：亞型多樣性(isoform diversity)、選擇性剪接(alternative splicing)、表達變異體(expressed variants)等。

以下，我們介绍使用PromethION平台，從10x Genomics cDNA中進行單細胞轉錄組的完整流程:

1. 使用10x Genomics Next GEM單細胞3’、5’，生成帶有條碼Barcode的全長cDNA。
2. 接著使用帶有Biotin Primer針對10x Genomics Barcode cDNA樣本進行PCR擴增。之後用鏈親合素(Streptavidin)，去除缺乏細胞條碼Barcode的短片段cDNA。去除這些產物非常重要，這樣可以使全長cDNA的測序效率最大化。
3. 接著使用Oxford Nanopore的測序試劑盒制備測序文庫。
4. 最後，使用PromethION平台系統進行測序。PromethION測序晶片生成的Reads數量多，可根據需要通量去調整。
5. 分析使用Oxford Nanopore的EPI2METM Labs工作流程。

欲知詳細分析下回分曉~