RNA 萃取時需注意,RNA 本質並不穩定,其為單股核酸,易遭水解或熱降解。此外,RNA降解酶 (RNase)比DNA降解酶 (DNase) 穩定且較難失去活性,外在環境須注意RNase 的汙染,除了操作人員必須戴上手套,萃取過程使用的器具及溶液也須經過 RNase 抑制劑預先處理,例如:diethylpyrocarbonate (DEPC)。細胞內也有 RNase 活性,因此收集到的樣本建議立刻進行 RNA 的製備工作。若須暫時儲存,應以液態氮將樣本急速冷凍後,儲存於 -80℃ 冷凍櫃。之後取出的樣本應立即以液態氮研磨的方式,加入 RNA 萃取緩衝液,以避免 RNase 作用。
目前最常見的RNA萃取方法為有機溶液萃取,通常使用 Trizol 進行萃取,其成分包含苯酚 (phenol) 和異硫氰酸胍 (guanidinium isothiocyanate) ,可以裂解細胞,同時抑制細胞釋放出的 RNase 作用。樣本和 Trizol 先混合,再加入氯仿 (Chloroform) 混合後離心,取出 RNA 所在之上方水層,通過異丙醇 (isopropanol) 及乙醇 (ethanol) 沉澱清洗,最後使用 RNase-free 緩衝液回溶。
管柱萃取與磁珠萃取也可以取得 RNA,操作方法與先前介紹的 DNA 萃取方法相似,透過調整 pH 值及鹽濃度,使 RNA 吸附於含二氧化矽 (silica) 的濾膜或磁珠,再進行後續沉澱與清洗,最終將 RNA 回溶於 RNase-free 緩衝液中。
萃取出的 RNA 建議不要多次解凍,可等量分裝儲存於 -80℃ 冷凍櫃,減少 RNA 降解影響後續實驗分析。
#詳盡的售後服務諮詢
#專屬的數據管理系統
#迅速的發送結果報告
#專業的生物資訊分析
#源資生技
#TriIBiotech
#RNAextraction
#RNA萃取
#Trizol
Next Generation Sequencing (NGS) Sequencing Service
1. Nanopore and Illumina offer a complete range of sequencing platforms for long and short sequences.
2. An excellent choice for high efficiency and quality.
3. Professional sample quality control processes and library preparation.
4. Professional bioinformatics analysis and service consultation.