【Experimental Techniques Series-Cell dissociation】

Date: 2023-3-24

將細胞團塊或組織分離成單一細胞的過程,稱為細胞解離 (cell dissociation)。可用於初代細胞分離培養、流式細胞儀分析、單一細胞定序等多項細胞測試,主要有機械、化學及酵素分離三種方式。

機械解離是最簡單的方式,利用切割、研磨、刮擦、震盪等物理力分解組織,使組織碎片中的細胞分離,此方法最為快速,但容易出現試驗間細胞量與細胞活力差異較大的問題,適合用於結構較不緊密的組織。

細胞與細胞間的連結需要陽離子調節,化學解離則是透過螯合陽離子,破壞細胞間的連結使其分離,常見的陽離子螯合劑有 EDTA 和 EGTA。此方法較為溫和,但需要較長的時間,且使用的化學品種類、數量、濃度和環境都會影響整體過程。

酵素解離一般使用蛋白酶分解細胞之間的附著蛋白,常見的有胰蛋白酶 (trypsin)、膠原蛋白酶 (collagenase)、中性蛋白酶 (neutral protease) 等等,這種方式比物理解離較耗時,且作用時間太久,可能造成細胞傷害或死亡。目前已有細胞解離試劑可以更溫和的分離細胞,例如:Accumax,其兼具蛋白酶和膠原蛋白分解的活性,且不含哺乳動物或微生物物質,作用後細胞存活率高且不須添加其他物質中和,讓細胞不受酵素影響。

從組織分離成單一細胞通常需要透過切割、研磨、酵素分解及過濾後得到懸浮細胞,繁瑣的過程對細胞造成物理損傷,且因需要較長的酵素處理時間,也可能有分解不均,或影響細胞基因表現產生變化,干擾實驗結果。市面上已有半自動或全自動化的組織解離機,包含不同組織樣本的標準化處理程序,可同時處理多個樣品,例如:Miltenyi GentleMACS、TissueGrinder,可節省許多人工處理時間。

以 GentleMACS 解離器 (dissociator) 為例,將組織切成小塊放入離心管中,加入酵素與培養液,蓋上具研磨裝置的離心管蓋,上機透過均質及酵素分解,完成的解離液再經過細胞過濾器篩選,離心去除上清液後再次加入緩衝液懸浮,即可進行後續實驗。TissueGrinder 同樣也有具研磨裝置的管蓋,不同的地方則是它的離心管口已有過濾器,且可以不額外添加酵素,只要上機執行均質及震盪等標準化程序,完成後直接離心過濾即可得到單細胞懸浮液進行後續研究。

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