Single cell RNA-seq除了透過微流體裝置機台，以油滴乳化封裝(oil emulsion encapsulation) 使單一細胞形成獨立的微滴(droplet)之外，還有哪些方法是不需要機器也能夠做到的呢?

1. 以不同介質，例如膠體或具有特定大小孔洞的Particle，將樣本細胞分散區隔成單一細胞，可利用帶有特定DNA Barcode及3’ polyA的磁珠，將細胞與磁珠混合，再將細胞lysis，磁珠便能抓取釋出的mRNA，經過RT-PCR獲得cDNA片段，供後續cDNA library建構及定序分析。
2. 另一種方式在細胞內直接進行反轉錄反應(In-cell Reverse Transcription Reaction)，將帶有特定DNA Barcode及3’ polyA的片段置入細胞內，進行細胞內RT-PCR。方法為將細胞分散至96孔盤後進行細胞內ligation及RT-PCR，再重新收集分散，重複此動作約2-3次，使其接上不同Barcode，最後將細胞lysis與PCR，接上最後一個Barcode，進而由其不同Barcode組合來區分細胞的種類並得知其基因表現。

當實驗室有預算或空間考量時，以上方法皆能協助您將Single cell RNA-seq應用於癌症、免疫、神經科學、傳染性疾病等研究領域，獲得突破性進展。

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