【Experimental Techniques Series- Overview of the Gibson Assembly method 】
Gibson組裝法 (Gibson Assembly)由Daniel Gibson博士所發展的一種高效率DNA片段組裝方法，在單管同溫條件下 (50°C)，可將多個帶有互補末端 (overlaps)的DNA片段進行連接的分子選殖技術。該方法使用三種酵素：T5 Exonuclease (切除5'端以暴露單股互補序列)、DNA polymerase (填補annealed region互補的核酸)並以DNA ligase鍵結磷酸雙酯鍵 (Phosphodiester bond)，混合成Gibson Assembly Master Mix，即可快速得到由多個DNA片段組裝完成的Ligation產物。
以下為Gibson Assembly的實驗流程：
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引子設計
在欲組裝的兩個或多個DNA片段末端設計含有20–40 bps overlaps區域的引子。
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片段製備
透過 PCR獲得含有overlaps的DNA insert 片段，再以限制酶作用或PCR方式獲得線性的vector片段。
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配製反應
欲接合2-3個片段時，建議使用的Molar Ratio為vector: insert = 1:2或1:3；欲接合4-6個片段時，建議使用的Molar Ratio為vector: insert = 1:1。與Gibson Assembly Master Mix (2X)混合均勻，通常反應總體積為 20 µL。
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Incubation
置於50°C 恆溫水浴或PCR機器中，以恆溫反應60分鐘。
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細菌轉型 (Transformation)
Ligation完成之產物可直接轉型 (transform)至勝任細胞 (Competent Cells)，塗盤篩選。
#Cloning
#基因合成
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