tRNA定序可用於比較不同實驗處理條件下tRNA的序列豐度、研究tRNA序列上的化學修飾對細胞功能的影響，以及在醫學上開發新的生物標誌物等功能。        

        tRNA定序試劑組nano-tRNAseq Kit是由Immagina Biotechnology所開發，以Oxford Nanopore第三代定序方式測定tRNA全長序列的試劑組。採用此試劑結合定序方式能夠直接得到tRNA的表達量，更能夠看到tRNA序列上的化學修飾 (如假尿苷、甲基化)的資訊，從而深入解析 tRNA在細胞中所扮演的角色。 

        若採用Illumina次世代定序平台進行tRNA定序，只能以cDNA為模板的方式進行，雖然這樣的流程對高通量分析與大樣本數來說很有利，但這些tRNA樣本需進行反轉錄與PCR擴增，會造成資訊缺失或偏差，且無法直接辨識序列的化學修飾等問題。所以相較之下，Nanopore能提供全長、原始型態的tRNA序列，不需要進行 PCR擴增、片段化或去修飾，保留序列與修飾資訊的完整性。

        實驗流程上，nano-tRNAseq Kit首先需要從total RNA中濃縮出的tRNA，並且去除tRNA 3’端上的核苷酸，之後接上kit所提供的adaptor與barcode做樣本辨識，此套組支援最多6個樣本barcode混合分析。之後進行反轉錄步驟，生成RNA:cDNA 雙股產物，這樣的結構可以讓RNA更穩定地進入nanopore，提升定序時的通過率與訊號品質。 

        以nano-tRNAseq Kit搭配nanopore方式定序讓我們可以在不犧牲天然修飾訊息的情況下，完整捕捉 tRNA的豐富度與修飾特徵，是研究tRNA中非常實用的方式。想要更深入探索細胞中這些tRNA所扮演的角色嗎？可參考使用nano-tRNAseq kit。

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